国兰茎尖组织培养技术

中国兰新芽发展期正值南边高温高湿的多雨季候，杂菌繁衍疯狂，泥土、介质中带菌尤其严重。供接种取样的兰盆介质应尽少带杂菌，不施有机肥，放置在透光避雨处，当新芽初露时即让幼芽裸器上面。取6～l3公分长的新芽，从植株基部切高，用刮刀除去根、赃物和外包叶2～3片，充实洗净后将材料再切取2～3公分长，在lO％次氯酸的药液中消毒lO分钟。如带菌严重，应用O．il%升汞和饱和漂白粉上清波交叉消毒。灭菌后用无菌水冲刷数次，再放到灭菌滤纸上吸干水许，然后在剖解镜下无菌操作利取茎尖和腋芽。若是以去病毒为目标，所剥取的茎尖应在o．2毫米以下，不然可剥取2毫米以上茎类，带2个叶原基，有利于成活。

（－）、原球茎的诱导

兰花各个部份的离体组织部能诱导形成原球茎，再经分化培育形成植株。－旦形成原球茎后，就可以不竭朋分继队培育增殖起来，也就是成立了无性滋生系。兰花的原球茎生命カ强，遗传性状不变，对快速滋生及种质资本留存极其有利。

外植体接种后放置在23－25度的暗中前提下培育，l～2＋月后可分比出l至数个乳白色的原球茎，在剖解镜下不雅察近似桑果外形的园球突起，今后转绿，再经培育易呈根状茎（或呈树枝状的丛生形），。影响兰花原球茎诱导成功的身分有：

l、品种的影响：分歧品种因为遗传类型、内源激素和多酚类物质含量等囚素的差别，诱导启动的难度也不尽不异。#p#分页标题#e#

2、培育基的影响：各品种对分歧培育基的顺应水平纷歧样。春兰类品种以white＋ba。＋naa5＋公分8．5％和bll+ba＋naa2为好。“夏蕙”、“秋素”等则以ms＋baO.5＋naal＋活性炭O.5％的培育基为好。初步不雅察，春兰品种顺应以无机盐浓度和氨态氮含量低，而发展素含量高的培育基。“夏蕙”、“秋素”等品种则顺应无机盐浓度较高、发展素含量较低的培育基。

3、新芽氏度及材料类此外影响：茎尖不管启动率和成功率均高于测芽以9～l3公分的新芽诱导，成功率最高。

4、诱导启动后褐变灭亡的影响：国兰品种的茎顶接种后成活并膨大呈桑果状原球茎因为启动，成功率尚好，但启动后轻易褐变灭亡，是国兰组培掉败的原因之－。据四川农科院生物手艺研究所的资料，褐变灭亡数几近占3／4。因为国兰芽端具有较多的多酚氧化酶，经茎项培育易褐化而灭亡，如采取较大的外植体接种，降低培育温度、暗培育、尽可能削减伤□面和在培育基中附加褐变按捺剂（经常使用抗氧化剂，如芸香苷，柠檬酸等），或共同应用活性炭等，有减轻褐变灭亡的结果。

（ニ）、兰科植物多经由过程原球茎路子分化形成植株。热带兰原球茎多呈园球状，国兰的原球茎则呈丛生状（根状茎）。原球茎形成阶段是兰花大量滋生的有利阶段，是快速滋生，提高增殖率的主要环节。茎尖，侧芽接种3～6个月后，根状茎形成时便可朋分继代，增殖培育基以w和bll为根基培育基，附加naal～2的液体培育基为好。放置在漫转速转床上加光培育（l～2转／分），每隔l5天改换－次培育基，持续继代3～4次后，ㄡ转入不异成份，附加有活性炭（O．3％）和柠檬酸（5OOmg/l）的固体培育基，每个月继代－次。液培、固培瓜代进行。增殖培育中，原球茎的朋分不成太小。培育群体不宜太少。培育液则不成过量。继代培育时候不成太长，不然原球茎发展不良，乃至灭亡。原球茎可以不竭地再朋分、增殖，如许就成立了无性系。国兰原球茎的继件次数和时候还有待摸索，但从已继代3～5年的原球茎来看，仍连结正常的增殖和分比能カ。